Cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)

Aunque la electroforesis de gel bidimensional (2-DE) es un método comúnmente utilizado para analizar todo el proteoma, tiene limitaciones tales como capacidad de separación limitada, efecto discriminatorio y procedimientos operativos complicados. A menudo es difícil obtener resultados satisfactorios para el análisis de un amplio rango dinámico, baja abundancia y proteínas hidrofóbicas. Chong et al. utilizó HPLC/espectrometría de masas para comparar y analizar la expresión diferencial de proteínas pre-malignas y cancerosas. La proteína fue separada por HPLC, y las fracciones recogidas fueron identificadas por MALDI-TOF-MS, de modo que la proteína fue analizada cuantitativamente en la expresión diferencial de los dos tipos de células. Como nuevo tipo de tecnología de separación, la cromatografía líquida multidimensional no tiene la limitación de la masa molecular relativa y el punto isoeléctrico. A través de la combinación de diferentes modos, elimina el efecto discriminatorio de la electroforesis de gel bidimensional. Tiene las características de alta capacidad máxima y automatización fácil. La cromatografía en fase inversa de intercambio de iones bidimensional (2D-IEC-RPLC) es el sistema de separación de cromatografía líquida multidimensional más utilizado en la investigación proteómica.